細(xì)胞程序降溫儀也叫XY程序降溫儀,程序冷凍儀,胚胎冷凍儀,是實現(xiàn)生物樣本低溫凍存的關(guān)鍵設(shè)備。在常溫樣本需要向液氮低溫環(huán)境轉(zhuǎn)移時,可以介導(dǎo)生物樣本的降溫過程。廣泛應(yīng)用在干細(xì)胞移植、臍血凍存、眼角膜、心臟瓣膜、皮膚等器官組織的低溫保存等領(lǐng)域,并正在向低溫材料學(xué)科和農(nóng)牧領(lǐng)域擴展。
樣品凍存過程中,降溫速率是影響細(xì)胞復(fù)蘇活性的關(guān)鍵因素:過快/過慢都會對細(xì)胞造成損傷以致影響復(fù)蘇活性。降溫速度過快時,細(xì)胞內(nèi)的水迅速結(jié)晶,冰晶會對細(xì)胞造成內(nèi)部損傷;如果降溫速度過慢,細(xì)胞外的水先結(jié)冰,會在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生滲透壓,會造成細(xì)胞脫水,降低細(xì)胞復(fù)蘇率。針對這些問題,可通過細(xì)胞程序降溫儀對降溫速率的“精細(xì)控制”輕松解決——降溫的不同階段,采用不同的降溫速率,可有效減少細(xì)胞損傷,提高復(fù)蘇率。
原理:生物樣品在降溫冷凍過程中,當(dāng)由液態(tài)向固態(tài)變化的相變期內(nèi)會釋放一定熱量,使其溫度回升,不控制降溫速率的冷凍過程將會導(dǎo)致組織細(xì)胞死亡。準(zhǔn)確地測定生物樣品的相變點, 用微機編制降溫程序,以便在樣品相變時加大液氮輸入量,克服相變樣品溫度的回 升,使細(xì)胞安全而迅速地度過相變期,這是提高被凍樣品成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
主要操作步驟包括:將細(xì)胞順序放入一系列逐漸增加保存劑濃度的溶液中梯度脫水,置入程序降溫儀快速降溫至-6℃植冰(人工誘導(dǎo)冰晶形成),然后緩慢降溫至-30℃~-80℃后液氮貯存。
注重點:在利用降溫儀降溫過程中,程序控制溫度下降速率越均勻,溫度,準(zhǔn)確度越好,這樣精種胚胎等樣品成活率越高,理論上選擇降溫到-80度后基本平穩(wěn),然后直接放入液氮或者深冷超低溫冰箱保存,當(dāng)然在經(jīng)費足夠情況下也可以選擇直接降溫到-180度的設(shè)備,這樣程序降溫到-180度的樣品成活率相對更高。